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蛋白质组学和代谢组学 修饰蛋白质组学 蛋白质修饰位点鉴定

蛋白质修饰位点鉴定 技术参数 常见问题 留言咨询

     蛋白磷酸化作为蛋白质翻译后修饰方式的一种,在细胞的调节过程中发挥着重要作用。研究蛋白质的磷酸化机制,有助于科学家对信号转导途径,疾病的分子机理以及新型激酶抑制剂的开发等有更深入的了解。由于蛋白质磷酸化的丰度低,大量非磷酸化肽段的信号抑制了磷酸化肽段的信号,所以常常需要对磷酸化蛋白质或肽段富集后再进行质谱鉴定。样品酶切后的产物由二氧化钛进行磷酸化肽的富集,富集后由高精度的质谱分析,分析数据由生物信息学软件进行数据检索。

实验流程



 



技术平台

       Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion™和Tribrid

技术优势 

       针对不同的修饰类型采取不同的富集方式

       富集效率高,可提高修饰肽段检测效率

       基于高精度的质谱分析,对修饰位点精确鉴定
       大
规模的蛋白质组修饰位点的鉴定与分析

       可鉴定多种修饰类型

鉴定类型

       单一或混合蛋白的磷酸化、N-糖基化、泛素化、乙酰化、甲基化等修饰位点鉴定

服务内容

       单一蛋白的修饰位点鉴定;

       高通量蛋白质组修饰谱分析。

应用领域

       疾病机理研究

       个性化医疗

       农业品种改良

       信号转导途径分析



送样要求

样品类型

样品要求(/组样品)

备注

蛋白质溶液

蛋白质总量≥300µg

重复实验则量翻倍,建议准备两份样品备用。

组织样品

样品总量≥0.1g

按照蛋白质组织提取效率(蛋白:组=7%

细胞样品

细胞数量≥10E7

胰酶消化,按细胞冻存标准离心收集细胞即可。

体液样品

清≥200µL,脑脊液≥200µL,尿液≥1mL ,泪液≥1mL.

 


1、 通过其他实验方法验证了目标蛋白质存在特定修饰,但是为什么质谱鉴定未检测到该修饰和修饰位点?

        该修饰蛋白质可能属于低丰度蛋白质,未经任何方法富集的话,修饰蛋白质很难检测到。


2、蛋白样品修饰位点全谱鉴定的技术原理?

        首先将蛋白样本酶解成肽段混合物,然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度,然后通过高质量的修饰类抗体和生物材料对修饰肽段进行富集,最后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析,通过相应的数据库检索匹配,一次可鉴定成百上千个修饰位点。

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